Calculateur de ratio de pureté d'un acide nucléique
Rédigé par Thierno Sadou Diallo, formule vérifiée selon notre méthodologie • Mis à jour le 09/09/2026
Le ratio de pureté A260/A280 se calcule avec absorbance à 260 nm ÷ absorbance à 280 nm. Un ADN pur affiche généralement un ratio de 1,8 ou plus, tandis qu'un ARN pur se situe généralement autour de 2,0.
Explication
Le ratio A260/A280 est une mesure de contrôle qualité standard en biologie moléculaire, lue directement sur le même spectrophotomètre (type NanoDrop) qui sert à mesurer la concentration d'un échantillon d'ADN ou d'ARN — voir notre calculateur de concentration d'acide nucléique pour cette seconde mesure, généralement effectuée en même temps. L'absorbance à 260 nm reflète principalement les acides nucléiques (ADN ou ARN), tandis que l'absorbance à 280 nm reflète surtout les protéines, en particulier les résidus aromatiques comme le tryptophane : un échantillon contaminé par des protéines ou des résidus phénoliques (utilisés dans certains protocoles d'extraction) absorbe donc davantage à 280 nm, ce qui fait chuter le ratio A260/A280. Pour l'ADN, un ratio de 1,8 ou plus est généralement considéré comme le signe d'une bonne pureté, tandis qu'un ratio inférieur à 1,6 signale une contamination probable ; pour l'ARN, plus riche en groupements phosphate qui absorbent davantage à 260 nm, le ratio attendu pour un échantillon pur est légèrement plus élevé, autour de 2,0. Ce ratio reste néanmoins une mesure indicative, pas une garantie absolue de pureté : le pH de la solution influence sensiblement le résultat (une solution trop acide sous-estime le ratio réel de 0,2 à 0,3, une solution trop basique le surestime dans les mêmes proportions), et un ratio dans la plage attendue n'exclut pas d'autres formes de contamination détectées par d'autres mesures, comme le ratio A260/A230 (non couvert par ce calculateur) qui révèle plutôt une contamination par des sels ou des solvants organiques résiduels. Avant même la mesure d'absorbance, un échantillon trop concentré peut aussi fausser la lecture : notre calculateur de dilution en série aide à préparer une dilution adaptée à la plage de linéarité du spectrophotomètre utilisé.
Exemple : échantillon d'ADN, A260 = 1,8, A280 = 1,0
Données d'entrée
Type : ADN. Absorbance à 260 nm : 1,8. Absorbance à 280 nm : 1,0.
Calcul
Ratio = 1,8 ÷ 1,0 = 1,8, exactement au seuil de pureté attendu pour l'ADN.
Résultat
Ce ratio de 1,8 indique un échantillon d'ADN pur, avec peu de contamination protéique probable.
Questions fréquentes
Pourquoi le ratio attendu diffère-t-il entre l'ADN et l'ARN ?
Parce que la composition chimique des deux molécules diffère légèrement (l'ARN contient du ribose et de l'uracile plutôt que du désoxyribose et de la thymine), ce qui modifie légèrement leur profil d'absorbance UV. En pratique, l'ARN pur absorbe un peu plus fortement à 260 nm relativement à 280 nm que l'ADN pur, d'où un ratio de référence légèrement plus élevé (environ 2,0 contre 1,8).
Un ratio dans la plage attendue garantit-il un échantillon totalement pur ?
Non, ce ratio détecte principalement une contamination par des protéines ou des résidus phénoliques, mais pas d'autres types de contamination comme les sels résiduels, les glucides ou certains solvants organiques, mieux détectés par le ratio complémentaire A260/A230. Un ratio A260/A280 dans la plage attendue est un bon signe, mais ne remplace pas d'autres contrôles qualité en cas de doute (électrophorèse sur gel, par exemple).
Pourquoi mon ratio varie-t-il légèrement d'une mesure à l'autre sur le même échantillon ?
Le pH de la solution tampon utilisée influence sensiblement la valeur mesurée : une solution légèrement acide tend à sous-estimer le ratio réel de 0,2 à 0,3, tandis qu'une solution légèrement basique le surestime dans des proportions similaires. Utiliser un tampon à pH neutre ou légèrement basique (comme le Tris-EDTA, TE) pour la dilution de l'échantillon avant la mesure limite cette variabilité.